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Roche_Light Cycler 480II熒光定量PCR儀主要應(yīng)用于哪里?
更新時(shí)間:2019-07-22   點(diǎn)擊次數(shù):2024次
   Roche_Light Cycler 480II熒光定量PCR儀主要應(yīng)用于哪里?
  熒光定量檢測(cè)系統(tǒng)由熒光定量PCR儀,實(shí)時(shí)熒光定量試劑,通用電腦,自動(dòng)分析軟件等構(gòu)成。設(shè)備由熒光定量系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)組成,用來(lái)監(jiān)測(cè)循環(huán)過(guò)程的熒光。
  與實(shí)時(shí)設(shè)備相連的計(jì)算機(jī)收集熒光數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)通過(guò)開(kāi)發(fā)的實(shí)時(shí)分析軟件以圖表的形式顯示。原始數(shù)據(jù)被繪制成熒光強(qiáng)度相對(duì)于循環(huán)數(shù)的圖表。原始數(shù)據(jù)收集后可以開(kāi)始分析。實(shí)時(shí)設(shè)備的軟件能使收集到的數(shù)據(jù)進(jìn)行正?;幚韥?lái)彌補(bǔ)背景熒光的差異。正?;罂梢栽O(shè)定域值水平,這就是分析熒光數(shù)據(jù)的水平。樣品到達(dá)域值水平所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)稱為Ct值(限制點(diǎn)的循環(huán)數(shù))。域值應(yīng)設(shè)定在使指數(shù)期的擴(kuò)增效率為大,這樣可以獲得準(zhǔn)確,可重復(fù)性的數(shù)據(jù)。如果同時(shí)擴(kuò)增的還有標(biāo)有相應(yīng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,線性回歸分析將產(chǎn)生一條標(biāo)準(zhǔn)曲線,可以用來(lái)計(jì)算未知樣品的濃度。
  所謂熒光定量PCR儀技術(shù),是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基因,利用熒光信號(hào)累積實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
  Roche_Light Cycler 480II熒光定量PCR儀已經(jīng)應(yīng)用于基礎(chǔ)科學(xué)研究、臨床診斷、疾病研究及藥物研發(fā)等領(lǐng)域,主要的應(yīng)用在以下方面:
  1.DNA或RNA的定量分析。包括病原微生物或病毒含量的檢測(cè),轉(zhuǎn)基因動(dòng)植物轉(zhuǎn)基因拷貝數(shù)的檢測(cè),RNAi基因失活率的檢測(cè)等。
  2.基因表達(dá)差異分析。例如比較經(jīng)過(guò)不同處理樣本之間特定基因的表達(dá)差異(如藥物處理、物理處理、化學(xué)處理等),特定基因在不同時(shí)相的表達(dá)差異以及cDNA芯片或差顯結(jié)果的確證
  3.基因分型。例如SNP檢測(cè),甲基化檢測(cè)等。
  隨著實(shí)時(shí)Roche_Light Cycler 480II熒光定量PCR儀技術(shù)的推廣和普及,該技術(shù)必然會(huì)得到更廣泛的應(yīng)用。
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